測定果膠DE公認的標準方法為化學滴定法，但此法樣品用量大、操作過程復雜且費時，近年來，紅外光譜作為一種快速光譜分析技術已越來越多地應用于多糖的鑒定與組成分析。其主要優點在于簡便、快速、低消耗以及樣品需求量少、不破壞樣品等。

國內外學者已將傅立葉變換紅外光譜儀FTIR作為研究多糖化學結構與性質的一種有效工具。目前國內尚無使用紅外光譜法測定果膠DE的報道，本實驗應用傅立葉變換紅外光譜儀對果膠多糖的酯化度(DE)進行快速定量分析，并與傳統的化學滴定法進行比較，研究其可行性。

實驗材料、試劑和儀器

主要試劑：不同酯化度果膠標準品，Sigma公司；KBr(光譜純)，上海試劑一廠。

主要儀器：傅立葉變換紅外光譜儀。

實驗材料：當歸，購自無錫山禾藥業有限公司，經鑒定為二級岷歸。

實驗方法

1、當歸多糖的制備

提取：當歸粉碎后，經水提、醇沉、透析、冷凍干燥得粗多糖W-ASP。水提剩下的沉淀采用50mmol·L1Na0H、0.5%的EDTA溶液室溫提取，得粗多糖E-ASP。

純化：W-ASP經DEAE—SepharoseCL-6B柱層析梯度洗脫，分別收集單一峰組分，透析，冷凍干燥得到3個純化組分、W_ASPl，W-ASP2和W-ASP3。

2、紅外光譜(FTIR)分析

將果膠標樣和當歸多糖測試樣品干燥，真空條件下研磨成粉狀。分別取果膠標樣(DE64%)和測試樣品微量，KBr研磨壓片，采用Nicolet NexusFTIR于4000～400cm_1圍內掃描。掃描32次，分辨率為4cm-1。

3、佩法測定樣品酯化度(DE)

標準樣品的制備：將三種已知DE分別為26%，59%，94%的果膠標樣按比例配制成DE為42.5%和76.5%的果膠標樣。

標準曲線的制作：分別取DE為26%，42.5%，59%，76.5%，94%的果膠標樣采用FTS7000系列FTIR在4000~400cm-1范圍內進行掃描。采用單次衰減全反射分析(ATR)，DTGS檢測器(D1G]LAB，Randolph，MA)。掃描128次，分辨率為4cm-1，每個樣品測3次，相應數值取平均值。以DE(%)為縱坐標，A1730／(A1730+A1630)為橫坐標，繪制標準曲線，建立線性回歸方程。測試樣品W-ASP，EASP，W-ASP2及W-ASP3的操作方法同上。

4、化學滴定法測定樣品酯化度

稱取500mg多糖樣品于錐形瓶，溶于100mL無CO2水中，滴入5滴酚酞試劑，用0.1mol·L-1標準NaOH溶液滴定樣品，記錄起始滴定值V1；加入10ml 0.5mol·L-1 NaOH溶液，劇烈振蕩，放置15min，再加入10ML 0.5mol·L-1 HCL溶液，振蕩至粉紅色消失；加入3滴酚酞試劑，用0.1mol·L-1標準Na0H溶液滴定樣品，記錄皂化滴定值%，按公式計算DE。

傅立葉變換紅外光譜法測定當歸果膠多糖的酯化度結論

應用紅外光譜技術建立了一種對果膠多糖酯化度(DE)進行快速定量分析的方法。DE與A1730(A1730+A1630)之間的線性回歸方程(r=0.9852)表明，果膠多糖的DE與其在l730和1630cm-1處的吸收峰面積之間有良好的線性關系。將FTIR法與傳統的化學滴定法進行比較，兩種方法間相對誤差為7％，具備良好的重現性，與傳統方法相比具有樣品用量少、操作簡單、靈敏度高、重復性好、分析速度快等特點。

經測定，從當歸中提取的果膠多糖粗品和純品的酯化度介于42.36％～54.06％之間。FTIR測定果膠多糖酯化度具有可行性，可成為替代化學滴定法的一種的快速易行、準確的方法。